期刊简介
本刊主要介绍骨与关节外科学的基础临床研究的新观点、新成果和新技术，反映我国骨科医学工作的最新进展，促进国内外骨科医学学术交流。主要面向广大从事骨科基础、临床工作的各级专业人员。
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- 杂志名称：中华骨与关节外科杂志
- 主管单位：中国骨与关节外科
- 主办单位：中华人民共和国卫生部
- 国际刊号：10-1316/R
- 国内刊号：翁习生 郝晓健
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 知网收录(中), 维普收录(中), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏, JST 日本科学技术振兴机构数据库(日)
重组人IL-1Ra与TGF-β1联合基因体外转染兔膝关节软骨细胞的研究
向川；李璐；卫小春；林有志；刘君；孙剑
关键词：软骨细胞, 基因转染, IL-1Ra, TGF-β1
摘要：背景:多基因联合转染具有增强功能基因协同效应、消除短板差异等作用,因而目前被受到广泛重视.目的:观察以逆转录病毒(RV)为载体,介导白介素-1受体拮抗蛋白(IL-1Ra)基因单独转染及其与转化生长因子-β1(TGF-β1)基因共同转染兔膝软骨细胞后的表达,及对其增殖代谢的影响.方法:构建逆转录病毒载体PLNCX-IL-1Ra-GFP与PLNCX2-TGF-β1-RFP,将其转染至包装细胞PT67,待形成阳性克隆后扩增培养,收集病毒上清,并计算病毒上清滴度.将体外培养的软骨细胞分为空白转染组、PLNCX2空载体转染组、IL-1Ra单基因转染组及IL-1Ra+ TGF-β1双基因转染组.酶联免疫吸附分析法(ELISA)进行瞬时基因表达(细胞转染后48h)及稳定基因表达(筛选后4周)的检测；免疫组织化学染色法检测各组IL-1Ra、TGF-β1及Ⅱ型胶原的表达；流式细胞仪检测各组细胞生长周期比例.结果:PLNCX2-IL-1Ra-GFP与PL NCX2-TGF-β1-RFP转染包装细胞后分别有绿色荧光与红色荧光表达；空白组与PLNCX2空载体转染组的上述指标无统计学差异(P＞0.05)；ELISA检测示基因转染组有明显基因表达；与空白组及PLNCX2空载体转染组相比,双基因转染组IL-1Ra、TGF-β1、Ⅱ型胶原含量明显提高,IL-1Ra基因转染组IL-1Ra含量提高明显,但TGF-β1、Ⅱ型胶原含量提高不明显；双基因转染组软骨细胞位于S期的比例明显增高,与其他组比较有统计学差异(P＜0.05).结论:逆转录病毒载体构建成功,基因转染软骨细胞后可获得稳定表达,双基因转染的软骨细胞生物学活性优于单基因转染,为基因治疗骨关节炎(OA)的研究提供实验基础.
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