白藜芦醇通过NF-κB信号通路抑制软骨细胞炎症因子的表达

摘要：背景：炎症因子如IL-1β、TNF-α等可通过一系列级联反应引起关节软骨破坏和炎症反应，在骨关节炎软骨病变中尤为重要。白藜芦醇（resveratrol, Res）具有抗炎、抗氧化等作用，研究Res对软骨细胞炎症因子表达的影响可为其预防、治疗骨关节炎提供参考依据。目的：探讨Res对脂多糖（lipopolysaccharides, LPS）诱导小鼠软骨细胞核因子-κB （nuclear factor-kappa B, NF-κB）活化及炎症因子基因表达的调节及其相关机制。方法：体外分离培养小鼠膝关节软骨细胞，Ⅱ型胶原免疫荧光检测进行软骨细胞鉴定。根据加入不同培养物分为3组：LPS组（1μg/ml LPS）；Res组（100μmol/L Res+1μg/ml LPS）；空白对照组。酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测各组软骨细胞中NF-κB抑制蛋白α（inhibitor of NF-κB-α, I-κBα）的表达量，细胞免疫荧光染色观察NF-κB核转位情况，实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）测IL-1β、TNF-αmRNA表达量。结果：荧光显微镜下可见软骨细胞核呈蓝色荧光，胞质呈红色荧光。ELISA检测：LPS组的I-κBα表达量低于空白对照组（P＜0.05），Res组明显高于LPS组（P＜0.01）。细胞免疫荧光染色检测：与空白对照组相比，LPS组中NF-κB发生明显的核转位，而Res组中NF-κB的核转位受到抑制。RT-PCR检测：LPS组中IL-1β和TNF-αmRNA的表达量与空白对照组相比明显上调，而Res组中IL-1β和TNF-αmRNA的表达量与LPS组相比明显下调，均有统计学差异（P＜0.05）。结论：Res可通过NF-κB信号通路影响软骨细胞IL-1β、TNF-αmRNA的表达，进而降低软骨细胞炎症反应，延缓关节软骨细胞退变。